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Thèse Magali Mondin

Rôle de l'interaction Neurexine-1β/Neuroligine-1 dans l'assemblage des post-synapses glutamatergiques et le recrutement des récepteurs AMPA

Le 25 novembre 2010

Mini-symposium: November 26, 2010 Organizers : Magalie Mondin, Olivier Thoumine
Neurexins and neuroligins in synapse development and function : molecular interactions, dynamics, and signaling, clic...

 

Résumé

Dans le système nerveux central, la synaptogenèse est un processus complexe multi-étapes qui se déroule aux contacts axones/dendrites. Les molécules d'adhérence neurexines/neuroligines jouent un rôle essentiel dans ce processus, en créant un lien physique entre les compartiments pré- et post-synaptiques et en participant au recrutement des complexes macromoléculaires essentiels à la fonction synaptique. Plus spécifiquement, le complexe neurexine-1β/neuroligine-1 induit la formation de post-synapses excitatrices, en recrutant des molécules d'échafaudage telles que PSD-95 et des récepteurs du glutamate.

Mon travail de thèse a consisté à étudier les mécanismes moléculaires mis en jeu par les adhésions neurexines/neuroligines lors de la formation des post-synapses glutamatergiques. En utilisant des systèmes biomimétiques (neurexine purifiée fixée sur des billes, ou agrégée par des anticorps réticulés), nous avons induit des adhésions spécifiques neurexine-1β/neuroligine-1 sur des neurones d'hippocampe en culture. Nous avons ainsi étudié la distribution dynamique des composants post-synaptiques (récepteurs AMPA, PSD-95) endogènes ou étiquetés avec des protéines fluorescentes, par vidéo-microscopie.

Dans un premier article, nous avons montré que la formation de ces contacts induisait un recrutement rapide de PSD-95 ainsi que des récepteurs NMDA et AMPA fonctionnels. En utilisant des récepteurs AMPA recombinants, j'ai montré que ce recrutement était dicté par la sous-unité GluA2.

Dans une deuxième étude, en comparant le recrutement de PSD-95 induit par la neurexine avec des anticorps non–activants, nous avons mis en évidence un mécanisme d'activation spécifique de neuroligine-1 induit par la liaison de neurexine-1β. L'utilisation de mutants ponctuels de neuroligine-1 a permis de montrer que cette activation passe probablement par la déphosphorylation d'une tyrosine unique située dans le domaine C-terminal de la neuroligine-1.

Enfin, en étudiant la diffusion latérale des rAMPA de surface par suivi de particules uniques fluorescentes (Quantum dots), ainsi qu'une batterie d'outils moléculaires pour moduler les adhésions neurexine/neuroligine (sur-expression, siRNA, souris KO), nous avons montré que les rAMPA sont recrutés aux adhésions neurexine-1β/neuroligine-1 via l'échafaudage PSD-95 et que ce recrutement nécessite la diffusion des récepteurs dans la membrane plasmique. Nous proposons ainsi que les récepteurs AMPA soient recrutés aux contacts naissants via un mécanisme original de diffusion/piégeage.

Mots clés: Synaptogenèse, neuroligine-1, neurexine-1β, adhérence, PSD-95, AMPA


Abstract

In the central nervous system, synaptogenesis is a multi step process occuring at axo-dendritic contacts. Neurexins/neuroligins adhesions are particularly involved in this process, making a bridge between the pre- and the post-synapse, and participating to the recruitment of macromolecular complexes essential for synaptic function. More precisely neurexin-1β/neuroligin-1 complex is specifically involved in the formation of excitatory synapses, inducing the recruitment of glutamatergic post-synapses components, such as PSD-95, and glutamate receptors.

During my PhD, I focused on the molecular mechanisms involved in glutamatergic post-synapses formation triggered by neurexin-1β/neuroligin-1 adhesions. Using biomimetic models (beads coated with purified neurexin, or purified neurexin cross-linked with aggregated antibodies) we induced specific neurexin-1β/neuroligin-1 adhesions on cultured hippocampal neurons. We then studied the dynamic distribution of either endogenous or recombinant post-synaptic components (PSD-95, AMPARs) with live-imaging techniques.

First, we showed that the formation of these contacts induced a rapid recruitment of PSD-95 and functional NMDA and AMPA receptors. Using recombinant AMPA receptors, I showed that this recruitment was mediated by GluA2 subunit.

In a second study, using systematic comparison between the recruitment of PSD-95 induced either by neurexin-1β or by "non activating" antibody binding on neuroligin-1, we revealed a specific activation mechanism of neuroligin-1 induced by neurexin-1β binding. Using point mutations on neuroligin-1, we showed that this activation mechanism is mediated by a tyrosine dephosphorylation on neuroligin-1 intracellular tail.

Finally, we studied AMPA receptor surface diffusion with single particle tracking experiments, using different molecular tools to perturb neurexin-1β/neuroligin-1 adhesions (overexpression, RNA interference, KO mice). We showed that AMPA receptors recruitment at new-formed neurexin-1β/neuroligin-1 adhesions occurs through PSD-95, and involves surface diffusion of AMPA receptors. We proposed an original diffusion/trap mechanism of AMPA receptors at nascent contacts.

Keywords: Synaptogenesis, neuroligin-1, neurexin-1β, adhesion, PSD-95, AMPA


Lieu: Plateforme de Génomique Fonctionnelle

Site Bx2 Carreire
Equipe INB

Mention Sciences Biologiques et Médicales

Option Neurosciences

Adresse du laboratoire
CNRS 5091 Université Bordeaux 2 Institut François Magendie 146 rue Léo Saignat 33077 Bordeaux cédex

Focus



Magali Mondin a préparé sa thèse sous la direction d' Olivier Thoumine dans l'équipe "Physiopathologie de la transmission synaptique glutamatergique" .

Jury

NAGY Frédéric DR (CNRS) Président du jury
VAROQUEAUX Frédérique DR(Max Planck) Rapporteur
FAIVRE-SARRAILH Catherine DR (CNRS) Rapporteur
SCHEIFFELE Peter Profes. (Biozentrum) Examinateur
GERROW Kimberly Post-doct (INSERM) Examinateur
HEINE Martin DR (IFN) Membre invité
THOUMINE Olivier CR (CNRS) Directeur de thèse

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