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Thèse Guillaume Frugier

Influence du domaine R43 de la sous-unité γ2 sur l'adressage des récepteurs GABAA

Le 2 février 2007

Résumé

Nous avons étudié par immunocytochimie l’influence de mutations ponctuelles du domaine R43 de la sous-unité γ2 sur l’expression des récepteurs GABAA. Nous nous sommes en particulier intéressés à la mutation γ2(R43Q) qui, impliquée dans une forme d’épilepsie, a fait l’objet de nombreuses études contradictoires. Nos résultats révèlent que ce domaine est un déterminant majeur de l’adressage des complexes, puisque tous les mutants obtenus sont, en comparaison de la sous-unité sauvage, moins détectés à la surface de neurones ou de cellules COS-7 transfectés. De plus, nous montrons, en contradiction avec des travaux antérieurs, que la mutation γ2(R43Q) n’a pas pour conséquence la synthèse d’un dominant négatif qui retient les complexes formés dans l’espace intracellulaire. Enfin, les données obtenues par co-immunoprécipitation suggèrent que la sous-unité mutée perturbe l’assemblage et/ou la stœchiométrie des récepteurs GABAA. Sur cette base, et en accord avec d’autres études, nous proposons que la mutation γ2(R43Q) modifie l’expression de conductances toniques nécessaires au fonctionnement normal des réseaux de neurones..


Abstract

We have used immunocytochemistry to study the influence of point mutations within the R43 domain of the γ2 subunit on GABAA receptors expression. Of particular interest was the γ2(R43Q) mutation that has been linked to epilepsy in humans, and which has caused considerable controversy in literature. Our results reveal that this domain is a major determinant in the targeting of complexes, since all the mutant subunits obtained were less detected on the surface of transfected neurons or COS-7 cells than their wild-type counterpart. Moreover, we show, in contradiction with previous work, that the γ2(R43Q) mutation does not lead to the synthesis of a dominant negative protein that retains the receptors in the intracellular compartments. Finally, data obtained in co-immunoprecipitation experiments suggested that the mutated subunit disturbed the assembly and/or stoichiometry of GABAA receptors. On this basis therefore, and in agreement with other studies, we postulate that the γ2(R43Q) mutation modifies tonic conductances that are necessary for the normal functioning of neuronal networks.

 

Focus


Guillaume Frugier a préparé sa thèse sous la direction de Maurice Garret, dans le Laboratoire de l'UMR 5227, "Mouvement Adaptation Cognition" dirigée par Jean-René Cazalets. Université Bordeaux 2
Institut des Neurosciences de Bordeaux

Jury

Mr D. Choquet DR CNRS, Bordeaux, Président
Mme V. Bernard Chargée de recherche INSERM, Paris, Rapportrice
Mr J.C. Poncer Chargé de recherche INSERM, Paris, Rapporteur
Mr J. Mérot Chargé de recherche CNRS, Nantes, Examinateur
Mr J. Lang PU, Bordeaux, Examinateur
Mr M. Garret, DR CNRS, Bordeaux, Directeur de thèse

Publications récentes

Frugier G, Coussen F, Giraud MF, Odessa MF, Emerit MB, Boue-Grabot E, Garret M.
A {gamma}2(R43Q) Mutation, Linked to Epilepsy in Humans, Alters GABAA Receptor Assembly and Modifies Subunit Composition on the Cell Surface.
J Biol Chem. 2007 Feb 9;282(6):3819-3828.