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Thèse Caroline Pruvost- Dequidt

"Rôle de la dynamique des adhésions neuronales N-cadhérine et L1 dans la croissance axonale et la synaptogenèse"

Résumé

Lors des processus développementaux d’élongation axonale et de synaptogenèse, les protéines d’adhésion, telles les cadhérines ou les Ig-CAM, jouent des rôles fondamentaux en permettant la formation de contacts entre neurones. Pour étudier la dynamique de ces contacts et leurs rôles dans ces processus, nous avons mis en œuvre des techniques d’imagerie sur des neurones primaires d’hippocampe (clivage thrombine, FRAP, pinces optiques, quantum-dots), ceux-ci étant associés à un système semi-artificiel de microsphères recouvertes de protéines d’adhésion purifiées (N-cadhérine et L1). Dans ce travail, j’ai précisé l’implication des processus de diffusion membranaire et d’exo- endocytose dans la dynamique des contacts L1-dépendants en utilisant une construction L1 portant un tag GFP exytracellulaire clivable à la thrombine. Cette étude a permis de mieux comprendre la place de L1 dans le trafic intracellulaire au sein du cône de croissance. J’ai également contribué à caractériser la liaison extracellulaire entre N-cadhérine et GluR2, sous-unité des récepteurs AMPA, et l’influence de l’expression de la N-cadhérine sur la mobilité de GluR2. L’interaction entre ces deux protéines pourrait être impliquée dans la formation ou la maturation des synapses.

Abstract

During the developmental process of axonal elongation and synaptogenesis, adhesion proteins such as cadherins and Ig-CAMs play a fundamental role by mediating neuronal contacts. In order to study the dynamics of these contacts and their role in these processes, we used imaging technics : thrombin clivage, FRAP, optical tweezers, quantum-dots, to observe live hippocampal primary neurons, associated to a semi-artificial system of microspheres coated with purified adhesion proteins (N-cadherin and L1). In this work, I precised how the processes of diffusion and exo- endocytosis were implied in the dynamics of L1-dependant contacts using a L1 construct bearing a extracellular thrombin cleavable GFP. This study led us to understand better how L1 was behaving in the membrane traffic at the growth cone. I also contributed to characterise the extracellular link between N-cadherin and GluR2, an AMPAR subunit, and the influence of N-cadherin expression on GluR2 mobility. The interaction between these two proteins could be implicated in the formation or the maturation of synapses.

Focus



Caroline Dequidt a préparé sa thèse sous la direction d'Olivier Thoumine et de Daniel Choquet / Cnrs Umr 5091

Jury

Président : Jochen Lang
Rapporteur 1 : René-Marc Mège
Rapporteur 2 : Valérie Castellani
Examinateur 1 : Hélène Feracci
Examinateur 2 : Laurent Fagni
Membre invité : Catherine Faivre-Sarrailh
Directeur de thèse : Olivier Thoumine